無(wú)菌制劑容器密封完整性的檢測(cè)應(yīng)用越來(lái)越多，美國(guó)藥典USP 1207及中國(guó)2015版無(wú)菌藥品GMP檢查指南都明確提到了無(wú)菌藥品容器的密封完整性檢測(cè)方法主要包括色水法（染色侵入法）、微生物挑戰(zhàn)驗(yàn)證方法（細(xì)菌挑戰(zhàn)）、真空衰減法為代表的無(wú)損密封試驗(yàn)方法、高壓放電法、激光頂空分析法等。本文簡(jiǎn)要?dú)w納一下幾種密封完整性方法的分類(lèi)、原理、特點(diǎn)。

一、各種無(wú)菌制劑容器包裝完整性驗(yàn)證方法介紹

USP 1207詳細(xì)闡述了5種確定性檢測(cè)方法：激光法、高壓放電法和真空衰減法、色水法、微生物挑戰(zhàn)法。其中傳統(tǒng)的微生物挑戰(zhàn)法、色水法屬破壞性方法，真空衰減、激光頂空、高壓放電方法為無(wú)損、定量、精度高的檢測(cè)方法，無(wú)損檢測(cè)方法受到部分FDA及歐盟審計(jì)官的明確推薦。
　　通常，我們將所有的驗(yàn)證方法分為如下三大類(lèi)：
　　第一類(lèi)：微生物挑戰(zhàn)驗(yàn)證方法，包括微生物挑戰(zhàn)法；
　　第二類(lèi)：化學(xué)驗(yàn)證方法，包括染色侵入法，即色水法；
　　第三類(lèi)：物理驗(yàn)證方法，包括高壓放電法、真空衰減法和激光頂空分析法。

二、各種包裝密封完整性檢測(cè)方法原理和特點(diǎn)

1、微生物挑戰(zhàn)驗(yàn)證方法

　　微生物挑戰(zhàn)法，顧名思義，就是用微生物侵入實(shí)驗(yàn)對(duì)制藥容器軋蓋密封系統(tǒng)進(jìn)行挑戰(zhàn)性試驗(yàn)，以確認(rèn)軋蓋后容器密封系統(tǒng)的完好性。首先，在西林瓶中灌入已滅菌的培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)正常的生產(chǎn)線(xiàn)進(jìn)行抽真空、壓塞、軋蓋后，將容器密封面浸入高濃度（如108個(gè)/ml）運(yùn)動(dòng)性菌液中，一段時(shí)間后取出，對(duì)容器外表面消毒并在合適的環(huán)境中放置一段時(shí)間后檢查是否有微生物浸入，以此確認(rèn)容器封裝口的密封完整性。同時(shí)，須做陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)，確認(rèn)培養(yǎng)基的促菌生長(zhǎng)能力。

微物物挑戰(zhàn)（微生物侵入法）MIST-01

2、染色侵入法（色水法）

　　USP 1207也將色水法和微生物挑戰(zhàn)法歸類(lèi)為概率性檢測(cè)方法。基本流程是將無(wú)菌制劑容器置于密閉的環(huán)境中，然后抽真空至一定真空度，再灌入染色液（例如0.1%亞甲基藍(lán)水溶液），然后恢復(fù)至正常氣壓并保持一段時(shí)間，存在破口的無(wú)菌制劑容器由于存在內(nèi)外壓差，染色液將進(jìn)入容器內(nèi)部，然后通過(guò)肉眼即可將存在密封完整性缺陷的容器檢出。
　　染色侵入法作為一種使用簡(jiǎn)單且有效率的檢漏方法，幾十年來(lái)在制藥行業(yè)得到了廣泛應(yīng)用，包括USP 31<381> PH.Eur.3.2.9，ISO 8362-5 Annex C，Modified ISO等機(jī)構(gòu)對(duì)染色液、真空度、真空度保持時(shí)間、常壓保持時(shí)間等參數(shù)進(jìn)行了明確規(guī)定。但染色侵入法檢測(cè)靈敏度、可靠性不高，是一種破壞性、非定量的檢測(cè)方法，同時(shí)存在微小漏孔容易堵塞、染料在更大體積中被稀釋、染料褪色、樣品污染等風(fēng)險(xiǎn)，將逐步被無(wú)損、定量的檢漏方法所替代。

LEAK-02密封性測(cè)試儀

    色水法與微生物挑戰(zhàn)法二者區(qū)別示例：微生物挑戰(zhàn)法是將密封、滅菌后的空包裝系統(tǒng)浸入高濃度銅綠假單胞菌的菌懸液中,施加特定壓力驅(qū)動(dòng)并保持4 h,取出后于33℃培養(yǎng)7 d;色水法是將密封后的空包裝系統(tǒng)浸沒(méi)于10％亞甲基藍(lán)水溶液中,放入真空箱中抽至75 kPa并保持30 min,恢復(fù)常壓后繼續(xù)浸沒(méi)30 min,取出,沖洗,目視檢查.結(jié)果顯示,微生物挑戰(zhàn)法和色水法對(duì)1、3、5、10μm孔徑的打孔樣品陽(yáng)性檢出率分別為0、30％、40％、100％和0、0、4.5％、15％;10％陽(yáng)性檢出率的靈敏度分別為2.2、8.3μm.說(shuō)明對(duì)于注射劑瓶包裝,微生物挑戰(zhàn)法的靈敏度略?xún)?yōu)于色水法。

3、真空衰減法

　　真空衰減法是一種確定性檢漏方法。作為一種無(wú)損、可靠的檢漏方法，檢測(cè)精度可達(dá)1.5μm。此方法獲得了FDA推薦，ASTM（美國(guó)材料試驗(yàn)學(xué)會(huì)）對(duì)此方法推出了包裝容器無(wú)損檢漏的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)ASTM F2338-09。
　　真空衰減法的基本原理是將無(wú)菌制劑容器置于專(zhuān)門(mén)的測(cè)試腔體中，對(duì)測(cè)試腔體抽真空，容器內(nèi)外壓差使得容器內(nèi)部氣體通過(guò)漏孔泄漏進(jìn)入測(cè)試腔體，主機(jī)壓力傳感器監(jiān)測(cè)到壓力的變化，將壓力變化值和參考值做比較，以判定容器是否合格。

　　
真空衰減法測(cè)試無(wú)蓖制劑包裝密封完整性原理圖

4、激光頂空分析法

　　激光檢測(cè)法是運(yùn)用TDLAS（可調(diào)諧半導(dǎo)體激光吸收光譜）激光檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)無(wú)菌制劑容器密封完整性的一種無(wú)損、定量方法，該方法獲得了FDA、美國(guó)藥典及歐盟藥典推薦，檢測(cè)精度優(yōu)于1μm。氧氣分子對(duì)760nm激光具有吸收效應(yīng)，根據(jù)Beer-Lamber（比爾-朗伯）光學(xué)吸收定律，被測(cè)氣體對(duì)激光的吸收量與氣體濃度成正比，通過(guò)光學(xué)相干技術(shù)獲得激光的二次諧波光譜圖，二次諧波光譜圖的幅值變化與容器中氧氣濃度相對(duì)應(yīng)，從而判斷容器的密封完整性。

　　
激光頂空法無(wú)損測(cè)試無(wú)菌制劑包裝密封完整性原理圖
 

    以上為無(wú)菌制劑容器密封完整性的檢測(cè)方法、原理、特征的歸納介紹。目前國(guó)內(nèi)GMP提到完整性測(cè)試無(wú)菌藥品，其包裝密封完整性測(cè)試更多是針對(duì)容器本身的密封性能，仍然采用的傳統(tǒng)的微生物挑戰(zhàn)法、色水法較多，投入成本較低，近幾年陸續(xù)引入無(wú)損的真空衰減法、高壓放電法、激光法等方法。 山東泉科瑞達(dá)儀器為專(zhuān)業(yè)藥包材檢測(cè)儀器制造與服務(wù)商，已與國(guó)內(nèi)藥企建立了廣泛的合作，我們希望以公司技術(shù)實(shí)力為依托為業(yè)內(nèi)提供更多的量身訂制藥包材檢測(cè)儀器與服務(wù)，更好的為我國(guó)醫(yī)藥醫(yī)療行業(yè)質(zhì)量控制貢獻(xiàn)力量。